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液相色譜儀日常維護(hù)

1.1 泵

     泵是液相色譜儀的心臟，須精心維護(hù)和保養(yǎng)。處于良好工作狀態(tài)的泵，其基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而平穩(wěn)。要使泵具備良好的操作性能，應(yīng)該保持泵系統(tǒng)的潔凈。具體做法如下：

     1）要選擇優(yōu)質(zhì)的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用0.45um膜過(guò)濾，并進(jìn)行脫氣處理。

     2）泵開(kāi)始使用時(shí)，一定要對(duì)其排氣數(shù)分鐘；使用完畢，要用流動(dòng)相清洗泵和色譜柱約30分鐘；如果使用了緩沖溶液，一定要用合適的流動(dòng)相徹底清洗干凈。

     3）定期檢查并更換在線過(guò)濾片及有關(guān)的墊圈，并經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔過(guò)濾頭。

     4）改變流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)避免沉淀產(chǎn)生，以防止泵堵塞。

1.2 色譜柱

     色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱應(yīng)具有很高的塔板數(shù)，且儀器基線平穩(wěn)。色譜柱比較嬌氣，在平時(shí)的工作中須注意以下事項(xiàng)：

     1）色譜柱不能夠碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；安裝時(shí)，一定要保證閥件或管路的清潔。

     2）流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度流動(dòng)相。

     3）在滿足靈敏度的情況下，盡可能使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較“臟”，要進(jìn)行凈化或提純處理。

     4）分析結(jié)束后，要清洗掉進(jìn)樣閥中殘留的樣品，并用流動(dòng)相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱。

     5）如色譜柱長(zhǎng)期不用，應(yīng)該用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或長(zhǎng)期給柱子補(bǔ)充合適的流動(dòng)相。

1.3 檢測(cè)器

     對(duì)于紫外檢測(cè)器，在分析前，柱平衡得差不多時(shí)，開(kāi)啟檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。

1.4 進(jìn)樣器

     分析結(jié)束后，應(yīng)反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。

2、常見(jiàn)故障的分析與排除

      即使日常精心維護(hù)的液相色譜儀，隨著使用時(shí)間的增加或使用者經(jīng)驗(yàn)的不足也會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題或故障?，F(xiàn)將液相色譜儀容易出現(xiàn)的故障及解決辦法介紹如下：

2.1 保留時(shí)間變化

     保留時(shí)間的變化有三種情況：波動(dòng)、縮短、延長(zhǎng)。

     保留時(shí)間出現(xiàn)波動(dòng)時(shí)，應(yīng)檢查柱溫是否處于恒溫狀態(tài)，如果設(shè)置為室溫，氣溫的變化會(huì)引起保留時(shí)間的波動(dòng)，應(yīng)該設(shè)置為恒定溫度；等度和梯度間還沒(méi)有充分達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)，應(yīng)該用十倍以上柱體積的流動(dòng)相去平衡色譜柱；緩沖液濃度太低時(shí)，應(yīng)換用>25mmol/L的緩沖液；色譜柱被污染或已接近柱壽命時(shí)，應(yīng)更換保護(hù)柱或換新色譜柱。

      保留時(shí)間縮短時(shí)，流速增加，應(yīng)檢查流速的設(shè)定；柱溫高時(shí)，應(yīng)檢查柱溫的設(shè)置；進(jìn)樣量太大時(shí)，減少樣品用量或降低樣品濃度；流動(dòng)相的組成發(fā)生了改變，比如流動(dòng)相中易揮發(fā)性有機(jī)相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀；流動(dòng)相的pH值應(yīng)保持在3-7.5范圍內(nèi)，否則回引起柱鍵合相的流失。

     保留時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)，流速減小，應(yīng)檢查流速的設(shè)定和管路是否有泄露；柱溫低時(shí)，檢查柱溫的設(shè)置；流動(dòng)相的組成發(fā)生了改變，比如流動(dòng)相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀；檢查流動(dòng)相的pH是否在3-7.5范圍內(nèi)，否則會(huì)引起柱鍵合相的流失。

2.2 峰拖尾

     色譜柱超載時(shí)，要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品或使用高容量的色譜柱；色譜柱性能不佳時(shí)，更換色譜柱；死體積或柱外體積過(guò)大時(shí)，將連接點(diǎn)降至最低，并對(duì)所有連接點(diǎn)作合理的調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接；加入硅羥基，其作用是鈍化色譜柱，增加緩沖液的濃度，降低流動(dòng)相的pH值，鈍化樣品；出現(xiàn)峰干擾時(shí)，應(yīng)清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相。

2.3 峰展寬

     進(jìn)樣體積過(guò)大時(shí)，用流動(dòng)相配樣；樣品過(guò)載時(shí)，進(jìn)小濃度、小體積樣品；在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展時(shí)，進(jìn)樣前后排出氣泡，以降低擴(kuò)散；流動(dòng)相粘度過(guò)高時(shí)，提高柱溫，并采用低粘度流動(dòng)相；等度洗脫，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，要增加流速或改用梯度洗脫；柱外體積過(guò)大時(shí)，將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小[1]。

2.4 基線噪聲

     流動(dòng)相或檢測(cè)器中有氣泡時(shí)，要對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理；檢測(cè)器燈有連續(xù)噪聲時(shí)，更換氘燈；出現(xiàn)由污染引起的隨機(jī)噪聲時(shí)，應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品、使用HPLC級(jí)試劑；偶然有噪聲時(shí)，可能是來(lái)自電源的干擾，如果電壓不穩(wěn)時(shí)，應(yīng)采用穩(wěn)壓電源。

2.5 肩峰或分叉

      進(jìn)樣量太大或樣品濃度過(guò)高時(shí)，要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品；樣品溶劑太強(qiáng)時(shí)，應(yīng)使用軟弱的樣品溶劑；色譜柱性能欠佳時(shí)，應(yīng)更換色譜柱。

2.6 鬼峰

      色譜柱未達(dá)到平衡時(shí)，要繼續(xù)平衡色譜柱；樣品中溶劑出峰時(shí)，使用流動(dòng)相作樣品的溶劑；出現(xiàn)進(jìn)樣閥余峰時(shí)，使用強(qiáng)溶劑清洗進(jìn)樣閥，并改進(jìn)閥和樣品的清洗程序；流動(dòng)相用水不合格，應(yīng)使用HPLC級(jí)的水。

3 使用注意事項(xiàng)

      在使用混合溶劑作流動(dòng)相時(shí)，一定要先混合，再過(guò)0.45um濾膜；等流動(dòng)相恢復(fù)至室溫，用超聲波或He氣進(jìn)行脫氣處理后，方可使用。

      更換流動(dòng)相時(shí)，必須按一定的程序進(jìn)行，否則會(huì)產(chǎn)生問(wèn)題。更換流動(dòng)相有三種情況：互溶性流動(dòng)相的更換、無(wú)互溶性流動(dòng)相的更換和緩沖溶液的更換。對(duì)于第一種情況，先用準(zhǔn)備更換的流動(dòng)相把吸濾器完全清洗，再打開(kāi)儀器的排液閥，按清洗鍵，清洗泵中的流動(dòng)相。將吸濾器放入新流動(dòng)相中，減慢流速清洗數(shù)分鐘后關(guān)閉排液閥。接下來(lái)清洗色譜柱和檢測(cè)器檢測(cè)池直到基線平穩(wěn)。對(duì)于第二種情況，先用與新舊流動(dòng)相都互溶的中間清洗液（如：異丙醇）清洗，再用新流動(dòng)相清洗，具體過(guò)程與第一種情況相同。對(duì)于第三種情況，應(yīng)先用蒸餾水作為中間清洗液進(jìn)行清洗，再用新流動(dòng)相清洗即可。