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1、  色譜柱長時間不用，存放時，柱內應充滿溶劑，兩端封死（如ACN適于反相色譜柱，正相色譜柱用相應的有機相）

2、  對于手動進樣器，當使用緩沖溶液時，要用水沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數次，每次數毫升。

3、流動相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長菌）。

4、帶seal-wash的 1100，要配制90%水+10%異丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，溶劑不能干涸。

 5、其它主意事項見說明書，或由現(xiàn)場工程師介紹。

維護知識問答

1、為什么溶劑和樣品要過濾?

     溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、儀器起到保護作用，消除由于污染對分析結果的影響。

色譜柱：由于填料顆粒很細，色譜柱內腔很小，溶劑和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和毛細管容易堵塞。

儀器：溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內的藍寶石活塞桿和活塞的磨損。

樣品過濾頭的類型：

30mm內徑：適用于大進樣量的過濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50μl。

13mm內徑：適用于范圍廣的過濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料為纖維素。

3mm內徑：適用于小進樣量的過濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格。處理樣品體積為7μl。

濾膜類型：

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。

醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質和其相關樣品。

尼龍66濾膜：適用于絕大多數有機溶劑和水溶液，可用于強酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機溶劑。

2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項？

     HPLC用緩沖鹽時,由于泵頭內的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細小鹽粒非常堅硬,它附著在藍寶石活塞桿上,隨著藍寶石活塞桿的往復運動,容易產生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時,必須使用該在線沖洗選項.

清洗液配制:  90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。

3、為什么Agilent 1100LC的流動相管路非常細?

     在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應”對分析結果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數比在氣體中小4~5個數量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2個數量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應減之最小，獲得理想的分析結果，Agilent 1100LC 使用加工工藝難度高的毛細管線作為流動相管路。

     毛細管線分類：0.17mm內徑 ------綠色 ;0.12mm內徑-------紅色。            

     PEEK 管線：內徑 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。

     毛細管線優(yōu)點: 柔韌性好.

     Agilent 公司同時備有1/16in 的粗外徑毛細管線,適用于不同習慣的用戶 ,優(yōu)點是剛性好,但柔韌性差一些。 

4、流動相使用前為什么要脫氣？

     流動相使用前必須進行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會造成熒光猝滅。

常用的脫氣方法比較：

氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。

加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染。

抽真空脫氣法：易抽走有機相。

超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-

             15min，此法效果最差。

在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機利用膜滲透技術， 在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

5、如何防止溶劑瓶內溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？

     溶劑的質量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=4—7）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內溶劑過濾器的堵塞。

A：請嚴格執(zhí)行溶劑過濾。

B：請勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液

C：如果應用許可，可在溶劑中加入0.0001---0.001M的疊氮化鈉.

D:在溶劑瓶內溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。

E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。

堵塞后的處理法方法：

     將過濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。

6、Agilent 1100LC泵如何維護？

     Agilent 1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量準確的流動相，及時合理的維護非常重要。

A：流動相使用前請必須脫氣、過濾。

B：使用緩沖鹽時，要加在線Seal-wash選項。

C：關機前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關泵，（適于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當的溶劑沖洗]

D：及時更換Purge Valve內的過濾芯。（當打開Purge Valve時，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。

E：使用合適的密封圈。

7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？

     泵頭活塞的標準密封圈能適合于大多數應用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標準活塞密封圈，特別是長時間使用時，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-1420  2/pk）

     注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0—200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設為200bar。

8、使用梯度比例發(fā)時要注意那些事項？

    當鹽溶液與有機溶劑溶液混合時，鹽溶液能與有機溶劑溶液完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機溶劑中，出現(xiàn)問題。

強烈建議：當使用緩沖鹽溶液和有機溶劑時，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。

9、在線真空脫氣機使用要注意那些事項？

    一般來說，Agilent 1100LC 的真空脫氣機無需過多維護，只需注意幾個注意事項就可以了。

A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機腔體；更換不同類型的溶劑時，要先抽空，再抽滿。

B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。

10、更換色譜柱時要注意什么事項?

     在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應”對分析結果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數比在氣體中小4~5個數量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2個數量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的展寬，而使柱效降低 。為使柱外效應減之最小，獲得理想的分析結果，儀器的流動相管路連接非常重要,一般Agilent 1100LC 在第一次安裝時,均有受過專業(yè)培訓的安裝工程師負責安裝,各種接頭會處理的非常完美。客戶只需在更換色譜柱時注意接頭處理就可以了，一般柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或PEEK管線手擰街頭，當完成第一次安張后，不銹鋼卡套已固定死，當接不同的柱子時，要注意柱子接頭處的形狀和長度，否則會產生一個非常大的死體積。

11、     手動進樣閥需做那些維護，使用時要注意什么？

     對于手動進樣器，當使用緩沖溶液后，或者進濃度差異比較大的樣品時要用專用工具而不是用帶針頭的注射器沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數次，每次數毫升。

注意事項：

●  安裝時六通閥的5，6出口要與注射器在同一水平線上，以防止虹吸現(xiàn)象的發(fā)生，導致進樣量的重復性變異。

●進樣量的多少要根據定量管的LOOP體積決定。

當樣品量少時：  進樣體積由注射器的進樣體積決定，但最大進樣體積 要小于1/2loop體積。

當樣品量較多時：進樣體積由定量管的體積決定，為保證樣品完全把定量管的流動相置換干凈，需注射5—6倍的LOOP體積。

●  C：要使用專用的液相注射器進樣，絕對不可以用氣相的注射器。