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緩沖溶液的原理

    在反相高效液相色譜分析中，選擇正確的緩沖液PH值，對可離解的化合物分析的重現(xiàn)性十分必要，如果PH值不恰當可能導(dǎo)致不對稱峰，寬峰，分裂峰，或肩峰，為能在定量分析中獲得低的檢測限，兩次分析之間較低的相對標準偏差（RSD）和保留時間的重現(xiàn)性，尖銳的，對成的峰很必要，我們將討論在使用緩沖液時如何選擇緩沖液的PH值，以及如何選擇正確的緩沖體系。

什么時候需要緩沖溶液？

    在反相色譜分析中，流動相的PH值一般在2.5－7之間，當分析物在反相條件下可離解，或樣品的PH值在2.5－7之外時，就需要緩沖液，在反相條件下可離解的化合物一般有氨基和羧基，他們的Pka在1－11之間，選擇正確的緩沖液PH值可保證可離解的官能團處于一種形式，離子形式或中性化合物的形式，如果樣品的PH值對柱子有傷害，則緩沖溶液可使其變溫和或減小其危害，

如何選擇緩沖液PH值

    在選擇緩沖液PH值之前，應(yīng)先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka兩個單位的值，有助于獲得好的或尖的峰，從HH公式得知，溶液PH值高于或低于兩個Pka兩個單位，化合物99％以一種形式存在，而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰，

讓我們通過一個離子來看如何選擇PH值

    例如苯甲酸圖一顯示的是他的離子形式和中性化合物的轉(zhuǎn)變，苯甲酸的Pka等于4.2，理論上講有HH公示得知，當PH值等于2.2時，99％的苯甲酸以中性化合物存在，PH值等于6.2時99%的苯甲酸以離子形式存在，所以當緩沖液PH值等于2.2時，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱，表1列出了一般緩沖液和他們的緩沖范圍。從表以知磷酸和檸檬酸緩沖液能用于PH知等于2.2。

當化合物只有氨基時，緩沖體系的選擇十分簡單，大多數(shù)化合物在PH值小于9時都被質(zhì)子化，所以所有PH值在7或更低時均適合應(yīng)用，你也許會問水的PH值大約是7，為什么還用緩沖鹽，因為緩沖液有助于增加方法的可靠性，以及的尖銳性，PH值降低有助于氨基化合物保留時間減小，減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用，而使峰更尖銳，從表1可值，任何緩沖液均可應(yīng)用，但我們認為PH值等于3的磷酸鉀鹽最適合用于氨基化合物，

在上面兩個例子中PH＝3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應(yīng)用，在一般情況下，他是含羧基，氨基化合物分析中最好的緩沖液，并且我們認為在氨基分析中鉀鹽比鈉鹽更好。

為離子對試劑選擇緩沖液

    為應(yīng)用離子對試劑的方法選擇緩沖液的過程是相似的，離子對試劑例如四丁基銨，十四烷基磺酸鈉，在流動相中可與化合物中可離解的官能團配對，在緩沖液中以離子形式存在的化合物就需要應(yīng)用離子對試劑。

應(yīng)用緩沖液PH值來調(diào)節(jié)選擇性

    當氨基保留造勢，氨基的保留隨PH的減少而降低，這個特性可以用來調(diào)節(jié)選擇性，如果兩個化合物共流出，一個含有氨基，改變PH值可以用來分離這一物質(zhì)對。由于可離解化合物的選擇性依靠PH值，所以變化PH值可以用來鑒別未知化合物的官能團，如果PH值變小，出峰便快，化合物中可能存在氨基，當PH變大,化合物出峰很快，或處在死時間處，化合物可能存在的羧基離子化后比中性化合物處分快。

總結(jié)

    正確選擇緩沖液在反相液相色譜方法中對于優(yōu)化尖峰，撿出限，和穩(wěn)定的保留時間十分重要，如果你知道化合物官能團信息和Pka這一過程將十分簡單。